Точная диагностика аспергиллеза при астме и других болезнях

Инфекционный аспергиллез — грибковая инфекция, угрожающая жизни, особенно у пациентов, чья иммунная система ослаблена химиотерапией или иммунодепрессантами. Несмотря на критическую потребность в раннем выявлении, его по-прежнему трудно диагностировать. Нередко аспергиллез развивается и при астме.
Ученые провели работу, в которой сравнили три диагностических теста и показали, что комбинация последовательности нуклеиновой кислоты (NASBA) и количественной ПЦР в реальном времени (qPCR) обнаруживает аспергиллез со 100% точностью.
Инфекционный аспергиллез вызван грибком Aspergillus fumigatus, который многие специалисты считают самой опасной формой в мире. Традиционные диагностические методы, такие как посев и гистопатология инфицированных тканей, часто не могут обнаружить Aspergillus.
В этом ретроспективном исследовании ученые оценили диагностическую эффективность двух анализов изучения нуклеиновых кислот (qPCR и NASBA) и одного метода обнаружения антигена (иммуноферментный анализ на основе галактоманнана [GM-ELISA]) с использованием образцов крови, собранных у восьмидесяти пациентов с высоким риском аспергиллеза. Из них 42,5% имели доказанный или вероятный инфекционный аспергиллез . Пациенты, попавшие в исследование, находились в отделениях интенсивной терапии, гематологии, неврологии, нефрологии, гериатрии и других.
Тесты оценивались отдельно и в комбинации. Индивидуально, NASBA имела самую высокую чувствительность (76,47%), тогда как qPCR выявила самую высокую специфичность (89,13%). NASBA также был тестом, который лучше всего доказал, что у пациента не было инфекции (отрицательная прогностическая ценность). Помимо этого, у NASBA и qPCR был высокий показатель эффективности диагностического маркера.
Сочетание тестов улучшило результаты. Комбинация NASBA и qPCR привела к 100% специфичности и 100% положительному прогностическому значению (вероятность того, что у испытуемых действительно есть инфекция).
Поскольку у каждого теста есть преимущества и недостатки, комбинация различных тестов может обеспечить лучшую диагностическую ценность, чем использование одного из них, отмечают авторы. Комбинация NASBA и qPCR должна быть полезной для исключения возможности аспергиллеза в подозрительных случаях, что уменьшает как дискомфорт, так и расходы для пациентов с ослабленным иммунитетом. С другой стороны, комбинация NASBA и qPCR могла бы быть более подходящей для скрининга пациентов, подозреваемых в инфекции, потому что этот анализ имел самую высокую чувствительность.
Авторы отмечают, что NASBA предлагает преимущества в виде быстроты выполнения, простоты и низкой стоимости по сравнению с qPCR и GM-ELISA. Хотя иммуноферментный анализ широко и регулярно используется для диагностики аспергиллеза, это исследование показывает, что у него низкая чувствительность (52,94%) с разумной специфичностью (80,43%), из-за чего он уступает как NASBA, так и qPCR.
Форма A. fumigatus является вездесущей в окружающей среде и находится, например, на гниющей растительности. Для здоровых людей воздействие грибка может быть несущественным, но оно может вызвать значительную заболеваемость и смертность для людей с ослабленной иммунной системой, включая пациентов, перенесших трансплантацию органов или СПИД. Даже пациенты с более умеренными нарушениями иммунитета, такими как диабет, плохое питание, использование стероидов или заболевания легких — например, бронхиальная астма — могут стать тяжело инфицированными. Симптомы могут включать лихорадку, кашель, затрудненное дыхание, боль в груди, судороги и очаговые неврологические проблемы.
Критерии высокого риска заболевания включали высокий уровень (1,3) -β-D-глюкана (> 60 пг / мл), иммунокомпромированный статус и одно из шести состояний (реципиент аллогенной трансплантации стволовых клеток, гематологические заболевания, тяжелый иммунодефицит, длительное применение кортикостероидов, лихорадка или инфильтрат грудной клетки, не реагирующий на обычные антибиотики, или радиологическое указание на грибковое заболевание). Пациенты не получали никакой противогрибковой терапии до тех пор, пока образцы крови не были собраны.
Первым испытанием было измерение полисахаридного компонента стенки грибковой клетки, которое можно было высвободить в сыворотку и бронхоальвеолярную лаважную жидкость во время инфекции. Измерение проводили с использованием коммерчески доступного набора.
Второй тест — экстракция ДНК Aspergillus и анализ qPCR в реальном времени. Очищенную ДНК анализировали с помощью специфичного для рода Aspergillus анализа qPCR с использованием специальных компонентов, нацеленных на ген 28S рРНК. Нижняя граница обнаружения была эмпирически определена как 10 колониеобразующих единиц Asipgillus conidia на реакцию.
Третий тест — экстракция РНК Aspergillus и анализ NASBA. Общая РНК экстрагировалась из плазмы с использованием набора для быстрой экстракции образца крови / жидкости. В качестве цели обнаружения была выбрана высококонсервативная область 18S рРНК, специфичная для рода Aspergillus. Пул управления, отрицательный контроль (РНК, экстрагированный у пациентов без инфекции Aspergillus) и положительный контроль (РНК, экстрагированная из Aspergillus в чистой культуре) были включены в каждую серию тестов. Тесты продемонстрировали высокую точность диагностики.

Источник: The Journal of Molecular Diagnostics